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甘露醇卵黄培养基基础原理和使用方法

2024-11-18

一、试验原理:

用于分离培养病原性金黄色葡萄球菌。

蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子;D—甘露醇为可发酵糖类;7.5%浓度氯化钠可抑制除葡萄球菌外的大部分微生物的生长;琼脂是培养基的凝固剂;酚红为pH指示剂,金黄色葡萄球菌可分解培养基中的甘露醇产酸,使菌落周围变黄,并能降解卵黄中的卵磷脂使菌落产生晕圈。

二、培养基配方(g/L

蛋白胨
10.0
D-甘露醇
10.0
牛肉粉
2.5
氯化钠
75.0
酚红
0.025
琼脂
15.0
pH 7.4±0.2
25℃

三、试验方法

  粉体装培养基的使用:

  1. 称取本品112.5g,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸1分钟,121℃高压灭菌15分钟,待培养基冷却至45-50℃时,无菌操作,加入50%卵黄乳液30ml,摇匀,倾入无菌平皿,备用。

  2. 制备质控菌液。

  3. 选择合适稀释度的质控菌液0.1ml,均匀涂布于平板上,每一稀释度接种两个平板。用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环,将接种环接触容器边缘3次去除多余液体,在平板表面划六条平行直线,同时接种两个平板。

  4. 36±1℃需氧培养24-48小时,记录实验结果。

四、结果观察与解释

  接种以下质控菌株,36±1℃需氧培养24-48小时:

质控菌株
菌株编号
接种量(CFU)
参比或计数培养基
方法
质控评定标准
其他特征
大肠埃希氏菌
ATCC25922
/ / /
G≤1
/
伤寒沙门氏菌
ATCC14028
/
/ /
G≤1
/
金黄色葡萄球菌
ATCC6538
20-200
TSA
TSA
PR≥0.7
黄色菌落,菌落周围有晕圈
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
20-200
TSA
TSA
PR≥0.7
黄色菌落,菌落周围有晕圈
表皮葡萄球菌
CMCC(B)26069
20-200
TSA
TSA
PR≥0.7
红色菌落,没有晕圈

五、露醇卵黄培养基微生物质控结果


六、注意事项
  本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。