一、培养基用途及原理:
用于婴儿配方奶粉和其它食品中阪崎肠杆菌的快速检测。
阪崎肠杆菌显色培养基是青岛海博生物公司根据GB4789.40生产的培养基,胰蛋白胨、大豆蛋白胨提供营养,氯化钠维持渗透压,琼脂为凝固剂,脱氧胆酸钠主要抑制革兰氏阳性菌的生长,柠檬酸铁铵、硫代硫酸钠可使产硫化氢的非目标菌呈黑色中心,阪崎肠杆菌可特异性分解底物5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡糖甙使菌落显蓝—绿色,其它不产硫化氢、不分解底物的菌一般显无色或黄色。
二、培养基配方(g/L)
胰蛋白胨
15.0
大豆蛋白胨
5.0
氯化钠
5.0
柠檬酸铁铵
1.0
硫代硫酸钠
1.0
脱氧胆酸钠
1.0
5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡糖甙
0.1
琼脂
15.0
pH 7.3±0.2
25℃
三、试验方法:
1.称取本品8.62g加入200ml蒸馏水,加热煮沸完全溶解,121℃高压灭菌15min,冷至50℃左右时,倾入无菌平皿。制备好的平板保存于2-8℃,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处,室温保存。
2.使用前,把制备好的平板放置室温10-20分钟。
3.制备质控菌液。
4.选择合适稀释度的目标菌质控菌液0.1ml,均匀涂布于平板及参比平板上,每一稀释度每种接种两个平板。
5.用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环,将接种环接触容器边缘3次去除多余液体,在平板表面划六条平行直线,同时接种两个平板。
6.36±1℃倒置培养基培养18-24小时,记录实验结果。
四、结果观察与解释
接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
参比或计数培养基 |
方法 |
质控评定标准 |
其他特征 |
阪崎肠杆菌 |
ATCC29004 |
20-200 |
TSA |
定量 |
PR≥0.5 |
蓝绿色菌落 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
/ | / |
半定量 |
G≤1 |
/ |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
/ | / |
定性 |
/ |
黄色菌落 |
伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
/ | / |
定性 |
/ |
无色菌落,有黑色中心 |
肺炎克雷伯氏菌 |
ATCC10031 |
/ | / |
定性 |
/ |
无色菌落 |
图1-2 阪崎肠杆菌显色培养基(DFI琼脂)微生物质控结果
a:阪崎肠杆菌,b: 金黄色葡萄球菌,c: 肺炎克雷伯氏菌,d:伤寒沙门氏菌,e:大肠埃希氏菌
五、注意事项
本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。